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小鼠葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)酶聯免疫分析試劑盒

時間:2018-10-30 17:13:48

V_star.jpg

長春市百奧瑞德生物技術有限公司旗下

品牌:Vstar | 貨號:HC45965

·  儲存條件 : 2-8℃保存,6個月有效

·  單位 :  盒



產品貨號:

產品品牌:

產品規格:

基本售價:

HC45965

Vstar

48T

1800.00元

HC45965

Vstar

96T

3200.00元


本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中小鼠葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)的含量。

本試劑盒僅供科研使用,不得用于臨床診斷

檢測前準備工作:

1. 請提前 20 分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現象;放置室溫,輕搖均勻,待結晶完全溶解后再配置洗滌液。可將 20ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成 500ml 工作濃度的洗滌液,未用完的放回 4℃

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按 1:20 稀釋,即 1 份 20×洗滌緩沖液加 19份蒸餾水。

實驗所需自備試驗器材:

1. 酶標儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成:

試劑盒組成

48 孔配置

96 孔配置

保存

說明書

1 份

1 份


封板膜

2 片

2 片


密封袋

1 個

1 個


酶標包被板

1×48

96


標準品

0.3ml×6 管

0.3ml×6 管

2-8℃保存

酶標試劑

5 ml×1 瓶

10 ml×1 瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1 瓶

6 ml×1 瓶

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1 瓶

6 ml×1 瓶

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1 瓶

6 ml×1 瓶

2-8℃保存

終止液

3 ml×1 瓶

6 ml×1 瓶

2-8℃保存

20×濃縮洗滌液

15ml×1 瓶

25ml×1 瓶

2-8℃保存

備注:

1.(96T/48T)打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。

2.標準品濃度依次為:32、16、8、4、2、0 ng/mL

實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠葡萄糖轉運蛋白 2(GLUT2)水平。用純化的小鼠葡萄糖轉運蛋白 2(GLUT2)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入小鼠葡萄糖轉運蛋白 2(GLUT2),再與 HRP 標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠葡萄糖轉運蛋白 2(GLUT2)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中小鼠葡萄糖轉運蛋白 2(GLUT2)含量。

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固 10-20 分鐘,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心 20 分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用 PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到 100 萬/ml 左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右(2000-3000 轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

7. 不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

注意事項:

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響 OD 值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品,不同批號組分不得混用。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

操作步驟:

1.標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL;。

2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品 10μl(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.加酶:每孔加入酶標試劑 100μl,空白孔除外。

4.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

5.配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用。

6.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。

7.顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

8.終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

9.測定:以空白孔調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的 OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

試劑盒性能:

1. 檢測范圍:1 ng/mL - 32 ng/mL

2. 批內與批間應分別小于 9%和 11%

3. 靈敏度:最低檢測濃度小于 0.1 ng/mL

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